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ELISA试剂盒如何保证测定温度?
时间:2019-08-26 点击次数:41
 
  ELISA试剂盒在实际应用的过程中,得通过不同的设计,不好走和方法都是有很多种类的,像是接法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。今天小编就跟大家讲讲ELISA方法设计都有哪些原理?
  ELISA试剂盒以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
  应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入,再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
  ELISA试剂盒TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品的浓度。
  ELISA如何保证测定温度?
  为了保证测定的准确性,通常要求测定条件完全一致。对于操作而言,主要是测定温度加液体积、加液顺序和反应时间一致。保证测定温度一致的措施通常如下。
  优先选用带温控装置的仪器,如上等分光光度计或者酶标仪,可以直接设定需要的温度。但是要注意预热。
  打开房间的空调,根据天气情况设定制冷或者加温,并且待室温稳定后再开始测定。
  提前一小时冰箱中取出试剂,放到室温中。还可以利用水浴锅保温反应体系中体积zui大的试剂,通常是缓冲液。这样,即使不是指定测定温度,但是可以保证不同样品基本在几乎同样的温度下测定。注意,待保温的试剂应该先放到水浴锅中,然后加温到指定温度,这样可以保证试剂温度与水浴锅温度一致;或者待保温试剂要在已经达到指定温度的水浴锅中保温超过半小时以上。
  如果当地温差变化大,一定要注意调整室温。

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